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酵母文庫

產品介紹

    一、核體系酵母文庫

    青島歐易母公司-上海歐易生物成立之初即開展了酵母文庫構建方面的工作,現結合多年構建文庫的經驗,推出兩套酵母雙雜交文庫構建體系:一是clonetech體系,在現有酵母雙雜交文庫構建流程(Clontech專利的BD MatchmakerTM library)基礎上加入獨特步驟,使文庫中高豐度表達基因明顯降低,從而使篩選時假陽性率明顯降低;二是Invitrogen體系,專利的Gateway位點特異性重組技術(Cloneminer cDNA library construction kit)構建雙雜交文庫。

    1. Clontech酵母雙雜交文庫

    服務內容

    ?均一化酵母雙雜cDNA文庫

    總RNA提取、純化→LD PCR 合成cDNA→cDNA均一化→均一化cDNA產物與線性化的AD質粒共轉化于酵母感受態(真核生物同源重組修復)→所有轉化液涂于40-100塊15cm平板→計數文庫→效價→集合所有克隆得到最終文庫。

    ?普通酵母雙雜cDNA文庫

    總RNA提取、純化→LD PCR 合成cDNA→cDNA產物與線性化的AD質粒共轉化于酵母感受態(真核生物同源重組修復)→所有轉化液涂于40-100塊15cm平板→計數文庫效價→集合所有克隆得到最終文庫。


    技術指標

    ?庫容量≥106;

    ?文庫滴度≥107cfu/ml;

    ?插入片段平均大于1kb(該數據以人類樣本構建酵母雙雜文庫的結果為參照,如樣品物種不同,且無參考數據,則我們不作出承諾);

    ?減低高豐度表達基因10-100倍。


    提供內容

    ?詳細的實驗報告;

    ?文庫質粒、菌液 。


    服務周期

    ?獲得合格的總RNA后,45個工作日


    2. Invitrogen 酵母雙雜交文庫

    技術特點

    ? 實驗起始量需5μg mRNA,所以要求客戶提供足夠量的樣品或總RNA;

    ? 由mRNA反轉錄成cDNA構建文庫,不經過PCR過程避免冗余現象,保證文庫質量;

    ?根據gateway的技術路線建庫,提供的初級文庫可以當做普通cDNA文庫使用;

    ?次級文庫質粒既可用共轉又可用mating的手段篩庫;

    ?如果次級文庫用完可以用初級文庫再次與AD載體重組獲得次級文庫。


    技術指標

    ? 庫容量≥106;

    ? 文庫滴度≥107cfu/ml;

    ? 插入片段平均大于1kb(該數據以人類樣本構建酵母雙雜文庫的結果為參照,如樣品物種不同,且無參考數據,則我們不作出承諾)。


    提供內容

    ?詳細的實驗報告

    ?初級文庫質粒、菌液

    ?次級文庫質粒、菌液

    備注:如果客戶需要轉化酵母,我們可提供100管酵母甘油菌工作液及母液(同clontech)。


    服務周期

    ?獲得合格的總RNA后45個工作日,如需轉化酵母延長15個工作日。


    材料要求

    ?為客戶構建指定的酵母雙雜交cDNA文庫,由客戶提供組織、細胞或總RNA。



    、膜體系酵母文庫構建

    傳統的酵母雙雜交系統僅限于核蛋白的互作分析,不能進行膜蛋白的研究。DUALmembrane 系統(DUALmembrane system)首先由瑞士的Dualsystems Biotech AG 公司開發出來,是基于分離的泛素(split-ubiquitin)介導的膜蛋白酵母雙雜交系統,它提供了不同于常規酵母雙雜交系統的蛋白體內分析方法,使得分析膜蛋白間的互作成為現實。


    技術優點

    ?在體內原位檢測蛋白-蛋白間的相互作用而無需核定位信號

    ?使用小的泛素結構域(NubG/Cub)使得相互作用蛋白質之間的空間位阻最小化

    ?蛋白間的互作信號靠泛素特異性結合蛋白(UBPs)剪切人工轉錄因子(LexA)啟動,而不是靠轉錄,因此可以檢測蛋白自身的轉錄激活或抑制序列

    ?此體系可以用來研究兩個膜蛋白的相互作用和一個膜蛋白與一個胞質蛋白的相互作用

    ?任何一種膜蛋白都可以作為誘餌,能使與待檢測蛋白融合的相互作用模塊(Cub-PLV-NubG)定位在細胞質內


    服務內容

    ?普通酵母雙雜cDNA文庫;

    ?均一化酵母雙雜cDNA文庫。



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